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概念：

穩(wěn)轉(zhuǎn)株是指基于特定細(xì)胞系構(gòu)建的持續(xù)過表達(dá)或干擾某特定基因的細(xì)胞系。用轉(zhuǎn)染或病毒侵染等方法將構(gòu)建好的含靶基因的載體導(dǎo)入細(xì)胞，然后根據(jù)載體中所攜帶的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的方法進(jìn)行陽性克隆篩選，得到可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白或者穩(wěn)定沉默特定基因的細(xì)胞株。常用的真核表達(dá)載體抗性標(biāo)志有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素（puromycin）。此外還可以通過稀釋法或流式細(xì)胞術(shù)獲取單細(xì)胞克隆。

原理與方法：

查閱篩選藥物puro/G418/潮霉素等在目標(biāo)細(xì)胞系中的使用劑量信息，設(shè)置濃度梯度進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)確定目標(biāo)細(xì)胞系的增殖速度和最適給藥條件。將目的基因?qū)爰?xì)胞，于轉(zhuǎn)染/病毒侵染細(xì)胞48h后開始加藥處理，每天觀察細(xì)胞增殖狀態(tài)和培養(yǎng)基顏色，每3~5天換液一次。篩選1~2周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。