動(dòng)物的選擇

考慮到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的繁殖周期、實(shí)驗(yàn)成本、動(dòng)物基因組研究進(jìn)程等多種因素，大鼠、小鼠、豚鼠等廣泛應(yīng)用于CB模型。

造模方法

一、煙熏法

煙熏法多以單一煙絲或混合煙霧材料(如煙葉、鋸末、刨花各50g)為刺激物置于特制煙室制備CB模型。

造模方法：選用大鼠或小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，30～50min/次，2～4次/d，持續(xù)28～60d。

結(jié)果顯示模型組小鼠氣道上皮出現(xiàn)大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體分泌功能亢進(jìn)，有黏液栓形成，肺泡灌洗液中白細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞數(shù)量明顯增加，蛋白含量上調(diào)，血漿和肺組織勻漿的超氧化物歧化酶活性和總抗氧化能力降低，丙二醛( MDA) 含量增加。

優(yōu)點(diǎn)：煙熏法致CB模型的建立呈漸進(jìn)性發(fā)展，簡(jiǎn)便可靠，炎癥病變確切，有助于研究CB發(fā)生發(fā)展過(guò)程中各階段的病理變化以及相應(yīng)炎細(xì)胞浸潤(rùn)及炎性標(biāo)志物的變化，為臨床早期診斷和治療提供理論依據(jù)。

缺點(diǎn)：致煙劑原料種類(lèi)單一，其燃燒產(chǎn)生的煙霧濃度難以控制，且實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)，穩(wěn)定性較差。

二、化學(xué)藥物法

多種化學(xué)藥物能夠引發(fā)CB，常見(jiàn)的藥物有二氧化硫、氯氣、氨水和脂多糖(LPS)。

1、二氧化硫吸入法

造模方法：選用大鼠及小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，將不同濃度的二氧化硫置于玻璃鐘罩或者特制熏箱，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分批放入進(jìn)行10s～30min熏制，1次/d，全程 15～28d。

優(yōu)缺點(diǎn)：本方法能夠引起CB的病理變化，病情發(fā)展嚴(yán)重后甚至導(dǎo)致氣流阻塞并發(fā)肺氣腫。本方法快速簡(jiǎn)易，但對(duì)氣管及支氣管的刺激性較大，過(guò)量的二氧化硫會(huì)引起呼吸道黏膜燒灼傷，上皮細(xì)胞增生壞死，容易導(dǎo)致動(dòng)物模型發(fā)生急性損傷甚至死亡，故選用合適的濃度以及建立過(guò)程，使氣道損傷程度適中尤為重要。

2、氨水霧化法

造模方法：選取小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，2min/次，每次間隔0.5h，5次/d，連續(xù)10d，10d后采用氨水霧化2min/次，每次間隔0.5h，2次/d，連續(xù)20d，全程總共30d。

模型組咳嗽次數(shù)明顯增加、支氣管黏膜上皮細(xì)胞空泡變性增生、細(xì)支氣管皺縮、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、纖毛發(fā)生倒伏脫失、部分肺泡隔斷裂成肺大泡、管腔大量漿液滲出及肺間質(zhì)血管擴(kuò)張淤血。

優(yōu)缺點(diǎn)：本方法簡(jiǎn)便易行，但在實(shí)施過(guò)程中污染較大。

3、氯氣吸入法

暴露于低濃度的氯會(huì)優(yōu)先對(duì)大呼吸道造成損害，而對(duì)肺泡損害較弱，從而造成廣泛氣道損害。高濃度的氯(800g/m3、5min) 會(huì)直接導(dǎo)致呼吸道和肺泡雙重?fù)p傷進(jìn)而導(dǎo)致急性氣道炎癥反應(yīng)的發(fā)生。由于氧化應(yīng)激標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)以及低分子量抗氧化劑對(duì)異常情況的緩解，進(jìn)而證明氯氣對(duì)氣道造成的損害本質(zhì)上是氧化性的。

4、LPS注射法

LPS是蛋白質(zhì)、類(lèi)脂質(zhì)及多糖的復(fù)合物，也是重要的致炎因子，可引起氣道上皮損傷，激活炎性細(xì)胞并釋放炎性因子，誘導(dǎo)氣道炎癥。

造模方法：選用小鼠或大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用氣管滴注等方法制備CB動(dòng)物模型。

優(yōu)缺點(diǎn)：本方法簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)、易定量、耗時(shí)短且污染較少。由于LPS注射法具有足夠的刺激強(qiáng)度，同時(shí)又考慮到人類(lèi)CB的發(fā)病機(jī)制，故可成功復(fù)制出CB的動(dòng)物模型。其缺點(diǎn)是LPS過(guò)量會(huì)導(dǎo)致急性肺損傷改變，不利于CB的階段性觀察，故前期造模條件的摸索尤為重要。

5、甲醛刺激法

造模方法：有研究者選用20%的甲醛(10mL)刺激模型組小鼠1h，連續(xù)刺激30d的方法復(fù)制CB 模型。自第10天起，該模型中小鼠的氣管及支氣管黏膜出現(xiàn)輕度充血水腫、杯狀細(xì)胞輕微增生、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及肺間質(zhì)輕度充血。隨造模時(shí)間延長(zhǎng)，小鼠體質(zhì)量日益減輕，同時(shí)炎癥逐漸加重。自20d起，部分上皮鱗狀化生明顯，較大支氣管出現(xiàn)不同程度的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。直至第30d，黏膜充血明顯，中、小支氣管黏膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)灶性變性壞死、脫落，杯狀細(xì)胞大量增生，大量黏液分泌及分泌物增加。

優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)是裝置和操作簡(jiǎn)單，成本較低，實(shí)際應(yīng)用較為方便。缺點(diǎn)為甲醛易揮發(fā)，污染環(huán)境。

總結(jié)

由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人類(lèi)的氣道存在解剖學(xué)、炎癥或纖維化上的差異，上述造模方法皆不能完全模擬CB病理特點(diǎn)，需在造模方法、試劑用量以及頻率等方面反復(fù)推敲，對(duì)比并分析各方法結(jié)果的差異，不斷完善CB模型的研究，同時(shí)對(duì)于其他新型造模方法的建立進(jìn)行進(jìn)一步的研究和探索。