動(dòng)物的選擇

試驗(yàn)動(dòng)物選擇有小鼠、大鼠、家兔、小型豬。

造模方法

一、小鼠

1、小鼠氯氣吸入法致肺水腫模型

取小白鼠一只，25g左右，稱體質(zhì)量，計(jì)數(shù)呼吸頻率及觀察呼吸深度。將鼠放入廣口瓶中慢慢通入氯氣，待瓶中生成一層薄薄云霧狀氣體后中止通氣。觀察動(dòng)物一般表現(xiàn)及呼吸變化。動(dòng)物死后即解剖，切開胸腔觀察肺組織變化，然后用線結(jié)扎氣管下端，在結(jié)扎的上端剪斷氣管取出全肺，清除肺周圍的其他組織。將肺放在玻璃培養(yǎng)皿內(nèi)，用紙吸去其外表水分，稱取肺的質(zhì)量，計(jì)算肺占體重的百分?jǐn)?shù)，與正常動(dòng)物對照。

2、小鼠雙光氣吸入致肺水腫模型

將12 mg·L-1雙光氣滴在濾紙上，干后放入密閉容器內(nèi)，將小鼠置于容器內(nèi)15min，即可形成肺水腫，全部操作應(yīng)在通風(fēng)櫥進(jìn)行數(shù)。

雙光氣主要作用于呼吸器官，認(rèn)為是刺激呼吸道感受器，通過迷走神經(jīng)將沖動(dòng)傳入四疊體以下中樞，再通過交感神經(jīng)將沖動(dòng)傳至肺血管，使其通透性增高，而發(fā)生肺水腫。

二、大鼠

1、大鼠甲醛吸入法致肺水腫模型

大鼠按隨機(jī)數(shù)字表分對照組（10 只）和甲醛組（14 只）。稱量，標(biāo)記，裝入大鼠籠中，置于染毒箱正中，啟動(dòng)加氧泵并蓋好箱蓋，動(dòng)物出現(xiàn)明顯癥狀時(shí)開始計(jì)時(shí)，讓大鼠在箱內(nèi)連續(xù)吸入甲醛染毒素 2 h，密切觀察大鼠的一般反應(yīng)情況并記錄，期間每隔25~30 min給箱內(nèi)噴入霧化甲醛1次，每次約10 mL 。染毒結(jié)束后取出大鼠，放室外通風(fēng)處，禁食不禁水，過5h后大鼠頸椎脫臼處死，稱體質(zhì)量及心臟和肺臟濕質(zhì)量，計(jì)算心肺系數(shù)、肺指數(shù)。

2、大鼠氯化銨中毒致肺水腫模型

稱重實(shí)驗(yàn)組大鼠腹腔注射6%氯化銨，然后觀察一般情況和呼吸，存活時(shí)間。對照組不作任何處理，對動(dòng)物實(shí)行安樂死。解剖，先結(jié)扎氣管以免液體外溢，將肺和心臟一起取出，剪除心臟和其它脂肪組織，用濾紙吸去肺表面的液體，用天平稱兩肺質(zhì)量，計(jì)算肺質(zhì)量系數(shù)，若肺質(zhì)量系數(shù)>1%，證明肺水腫已形成。

3、大鼠腎上腺素靜脈輸注致肺水腫模型

有研究者建立了大鼠的實(shí)驗(yàn)性肺水腫動(dòng)物模型。大鼠稱質(zhì)量后，用20%烏拉坦（5 mL·kg-1）腹腔注射麻醉或1%戊巴比妥鈉5 mL·kg-1肌肉注射麻醉，背位固定，做頸部正中縱切口（長2cm），分離氣管、左側(cè)頸總動(dòng)脈及右側(cè)頸淺靜脈。插入氣管插管固定，然后將其的一端與壓力換能器相連并連接在微機(jī)記錄系統(tǒng)，描記呼吸曲線。結(jié)扎頸淺靜脈遠(yuǎn)心端，在近心端插入靜脈插管（內(nèi)充 0.1%的肝素化生理鹽水）結(jié)扎固定，注入0.5%肝素（0.01 mL·kg-1）抗凝。結(jié)扎頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，動(dòng)脈夾夾閉近心端，插入充滿0.1%肝素的動(dòng)脈插管結(jié)扎固定，將動(dòng)脈插管經(jīng)壓力換能器連于記錄儀或微機(jī)系統(tǒng)上，記錄一段正常血壓曲線。經(jīng)頸淺靜脈推注0.01%的腎上腺素（0.1 mL·100 g-1），觀察動(dòng)物的表現(xiàn)及存活時(shí)間。動(dòng)物死亡或處死后，同上取出肺臟，稱重并計(jì)算肺質(zhì)量系數(shù)。

4、大鼠油酸靜脈注射致肺水腫模型

將試驗(yàn)動(dòng)物大鼠隨機(jī)分成2組，A組8只，B組12只。A組為正常對照組，不作任何處理；B組（試驗(yàn)組）為油酸致傷組，稱質(zhì)量，并沿大鼠尾靜脈注射油酸0.2 mL·kg-1，推注后觀察大鼠呼吸頻率、濕啰音、咳血、身體抽搐等體征變化出現(xiàn)的時(shí)間，并與A組進(jìn)行比較。1.5h后處死，A 組動(dòng)物也在同一時(shí)間處死。解剖時(shí)，先結(jié)扎氣管以免液體外溢，然后將肺和心臟一起取出，剪除心臟和脂肪組織，并用濾紙吸去肺表面的液體，最后用天平分別稱量 A、B組大鼠的肺質(zhì)量，計(jì)算肺質(zhì)量系數(shù)，若肺質(zhì)量系數(shù)>1%，證明肺水腫形成。

5、大鼠氯仿靜脈注射致肺水腫模型

有研究者采用大鼠，稱重，實(shí)驗(yàn)組大鼠腹腔注射25%氯仿12mL·kg-1，然后觀察一般情況和呼吸，存活時(shí)間。對照組不作任何處理，對動(dòng)物實(shí)行安樂死。解剖，先結(jié)扎氣管以免液體外溢，將肺和心臟一起取出，剪除心臟和其它脂肪組織，用濾紙吸去肺表面的液體，用天平稱兩肺質(zhì)量，計(jì)算肺質(zhì)量系數(shù)，若肺質(zhì)量系數(shù) >1%，證明肺水腫已形成。

三、家兔

1、家兔快速輸液致肺水腫模型

稱重家兔2%普魯卡因局部麻醉，將動(dòng)物仰臥固定于實(shí)驗(yàn)臺上，分離一側(cè)頸總動(dòng)脈以備取血，用BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄心率及呼吸頻率。注入生理鹽水（10 mL·kg-1），迷走神經(jīng)組切斷家兔頸部兩側(cè)迷走神經(jīng)。各組動(dòng)物以出現(xiàn)進(jìn)行性呼吸困難、發(fā)紺、鼻溢出粉紅色泡沫樣痰，可聞及濕性啰音并逐漸增強(qiáng)為建模成功。

2、腎上腺素靜脈輸注致肺水腫模型

沿家兔耳緣靜脈注入1∶5000腎上腺素 0.4~0.6 mg·kg-1；或在快速輸入大量生理鹽水后，將0.1%腎上腺素 0.5 mg·kg-1用生理鹽水稀釋10倍后加入輸液瓶中，繼續(xù)滴注，可造成肺水腫。腎上腺素復(fù)制肺水腫模型簡單、易操作、臨床癥狀典型，經(jīng)濟(jì)易行且重復(fù)性好，有關(guān)檢測指標(biāo)的變化充分體現(xiàn)了該型肺水腫的許多臨床特點(diǎn)。在注入后5min可聽及濕啰音，30min后即出現(xiàn)粉紅色樣痰，所測得的肺系數(shù)大于正常值約３倍左右。

3、家兔油酸靜脈注射致肺水腫模型

稱重，用25%烏拉坦100mg·kg-1耳緣靜脈注射麻醉家兔，固定手術(shù)臺上。剪去頸部被毛，分離氣管，行氣管插管術(shù)。沿家兔耳緣靜脈注入油酸 0.08 mL·kg-1，對照組不作任何處理。觀察家兔的呼吸及一般情況改變，通過計(jì)算機(jī)生物信號分析記錄系統(tǒng)描記呼吸曲線。若呼吸曲線明顯變淺變快或氣管內(nèi)涌出粉紅色泡沫樣液體，則提示肺水腫已形成，記錄肺水腫形成的時(shí)間。如有家兔死亡，記錄死亡時(shí)間。放血處死家兔，取氣管—支氣管—肺。用粗線自氣管下方結(jié)扎氣管，自上而下打開胸腔，將肺和心臟一起取出，剪去心臟，用濾紙吸去肺表現(xiàn)的水分，天平稱兩肺質(zhì)量，計(jì)算肺質(zhì)量系數(shù)，若肺質(zhì)量系數(shù)>5.0，證明肺水腫已形成。

4、家兔氯仿靜脈注射致肺水腫模型

有研究者采用家兔，稱重，用25%烏拉坦100mg·kg-1耳緣靜脈注射麻醉家兔，固定手術(shù)臺上。剪去頸部被毛，分離氣管，行氣管插管術(shù)。沿家兔耳緣靜脈注入10%氯仿（0.1 mL·kg-1），對照組不作任何處理。觀察家兔的呼吸及一般情況改變，通過計(jì)算機(jī)生物信號分析記錄系統(tǒng)描記呼吸曲線。若呼吸曲線明顯變淺變快或氣管內(nèi)涌出粉紅色泡沫樣液體，則提示肺水腫已形成，記錄肺水腫形成的時(shí)間。如有家兔死亡，記錄死亡時(shí)間。放血處死家兔，取氣管—支氣管—肺。用粗線自氣管下方結(jié)扎氣管，自上而下打開胸腔，將肺和心臟一起取出，剪去心臟，用濾紙吸去肺表面的水分，天平稱兩肺質(zhì)量，計(jì)算肺質(zhì)量系數(shù)，若肺質(zhì)量系數(shù)>5.0，證明肺水腫已形成。

四、小型豬

1、小型豬油酸靜脈注射致肺水腫模型

將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成2組。A組為正常對照組，B組為油酸致傷組，每組10只。兩組動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前均禁食12h。將動(dòng)物用3%的戊巴比妥鈉5mL和速眠新1mL肌注麻醉后，俯臥位固定于手術(shù)臺。3%的戊巴比妥鈉5mL·h-1維持麻醉。A組（對照組）不作任何處理，B組沿小型豬耳緣靜脈緩慢注入油酸0.15 mL·kg-1，30 min內(nèi)注完。觀察兩組動(dòng)物的呼吸及一般情況改變。B組動(dòng)物均以油酸推注4h后放血處死，A組動(dòng)物在同一時(shí)間放血處死，打開胸腔，分離出氣管，于環(huán)狀軟骨下結(jié)扎，在結(jié)扎處以上切斷氣管。B組動(dòng)物用線在氣管分叉處結(jié)扎以防止肺水腫液滲出，將氣管連同整個(gè)肺臟取出，小心剔除肺外組織。

總結(jié)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是生命科學(xué)研究及其他一些自然科學(xué)研究的重要手段，動(dòng)物肺水腫模型可以更好的研究人類發(fā)病原因、發(fā)病機(jī)理，對于臨床治療和藥物試驗(yàn)有重要的推動(dòng)作用。目前國內(nèi)外制備實(shí)驗(yàn)性肺水腫動(dòng)物模型方法很多，但是應(yīng)用不同方法和不同動(dòng)物導(dǎo)致的肺水腫結(jié)果都需要研究。通過肺水腫動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，為肺水腫防治研究提供模型依據(jù)。