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實(shí)驗(yàn)技巧

IHC常見(jiàn)問(wèn)題分析及處理


問(wèn)題

原因

建議

結(jié)果中顯色過(guò)深

一抗?jié)舛冗^(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時(shí)間

孵育溫度過(guò)高

室溫或4 ℃孵育

HRP標(biāo)記二抗孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

縮短時(shí)間

IHC結(jié)果中非特異性顯色

石蠟切片脫蠟不徹底

延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間

操作過(guò)程中沖洗不充分

增加沖洗的次數(shù)與沖洗時(shí)間

組織富含內(nèi)源性的生物素與過(guò)氧化物酶

使用相關(guān)試劑進(jìn)行封閉

發(fā)生抗原異位


蛋白封閉不充分

增加蛋白封閉時(shí)間

IHC結(jié)果中顯色強(qiáng)度弱

一抗?jié)舛冗^(guò)低或孵育時(shí)間過(guò)短

增加一抗?jié)舛然蜓娱L(zhǎng)孵育時(shí)間

試劑超過(guò)保質(zhì)期

實(shí)驗(yàn)前確認(rèn)試劑的保質(zhì)期

操作過(guò)程沖洗過(guò)度

適度沖洗

IHC結(jié)果中無(wú)染色

組織中無(wú)目的抗原的表達(dá)


一抗種屬來(lái)源與二抗不匹配

實(shí)驗(yàn)前確認(rèn)一抗的種屬來(lái)源


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