實(shí)驗(yàn)技巧
IHC常見(jiàn)問(wèn)題分析及處理
作者:admin2022-07-05 14:23
熱度:194
問(wèn)題 | 原因 | 建議 |
結(jié)果中顯色過(guò)深 | 一抗?jié)舛冗^(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng) | 降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時(shí)間 |
孵育溫度過(guò)高 | 室溫或4 ℃孵育 | |
HRP標(biāo)記二抗孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng) | 縮短時(shí)間 | |
IHC結(jié)果中非特異性顯色 | 石蠟切片脫蠟不徹底 | 延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間 |
操作過(guò)程中沖洗不充分 | 增加沖洗的次數(shù)與沖洗時(shí)間 | |
組織富含內(nèi)源性的生物素與過(guò)氧化物酶 | 使用相關(guān)試劑進(jìn)行封閉 | |
發(fā)生抗原異位 | ||
蛋白封閉不充分 | 增加蛋白封閉時(shí)間 | |
IHC結(jié)果中顯色強(qiáng)度弱 | 一抗?jié)舛冗^(guò)低或孵育時(shí)間過(guò)短 | 增加一抗?jié)舛然蜓娱L(zhǎng)孵育時(shí)間 |
試劑超過(guò)保質(zhì)期 | 實(shí)驗(yàn)前確認(rèn)試劑的保質(zhì)期 | |
操作過(guò)程沖洗過(guò)度 | 適度沖洗 | |
IHC結(jié)果中無(wú)染色 | 組織中無(wú)目的抗原的表達(dá) | |
一抗種屬來(lái)源與二抗不匹配 | 實(shí)驗(yàn)前確認(rèn)一抗的種屬來(lái)源 |