分子實驗
ELISA檢測
一、實驗概念
酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay,簡寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結(jié)合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)為免疫學中的經(jīng)典實驗。
二、實驗流程(具體步驟以說明書為準):
取出ELISA試劑盒→封閉→洗滌→加入一抗→洗滌→加HRP標記的二抗→洗滌→底物顯色→加入終止液→酶標儀讀數(shù)→數(shù)據(jù)分析
三、樣本要求
樣本形式 | 處理方式 | 保存 | 運輸 |
血清 | 干燥管(黃色)或促凝管(紅色)收集全血,室溫自然凝固10-20min,離心5-10min(2500-3500rpm/min)。采血過程中應避免溶血,仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
血漿 | 抗凝管(紫色、黑色、綠色)收集全血,采集后馬上混勻,靜置10min左右,離心5-10min(2500-3500rpm/min)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
尿液 | 用無菌管收集,離心10-20min(2500-3500rpm/min),仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
糞便 | 用無菌15ml離心管收集, 1g樣本+9ml PBS(0.01M,pH=7.4),充分勻漿完離心5-10min(2500-3500rpm/min),取上清備用 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
胸腹水、腦脊液、肺泡灌洗液 | 同尿液 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
細胞 | 檢測分泌性的成份:用無菌管收集,5-10min(2500-3500rpm/min),仔細收集上清 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
| 細胞內(nèi)指標:吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,胰酶消化細胞,收集細胞沉淀,PBS(0.01M,PH=7.4)清洗一次,PBS稀釋細胞懸液,細胞濃度達到1×107個/ml左右,充分研磨后超聲裂解(或反復凍融),以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,離心5-10min(2500-3500rpm/min),取上清備用 |
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動物組織 | 用無菌15ml離心管收集, 組織重量不能低于50mg,1g組織加入9ml PBS(0.01M,PH=7.4),手工或勻漿器將標本勻漿充分,勻漿過程中,PBS分2次加進去,這樣勻漿更充分。充分勻漿完離心5-10min(2500-3500rpm/min)。取上清備用(切勿加入細胞裂解液) | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
植物組織 | 用無菌15ml離心管收集, 組織重量不能低于50mg,1g組織加入9ml PBS(0.01M,PH=7.4),手工或勻漿器將標本勻漿充分,勻漿過程中,PBS分2次加進去,這樣勻漿更充分。充分勻漿完離心5-10min(2500-3500rpm/min)。取上清備用(切勿加入細胞裂解液) | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
牛奶 | 8000轉(zhuǎn)高速離心,離心后分三層,第一層是脂肪層,中間層是乳清,底層是固態(tài)蛋白,取中間層保存?zhèn)溆?。乳清量參照血清量。 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
注意事項: | |||
血常規(guī)樣本為EDTA-K2抗凝的全血樣本,抗凝管紫色頭蓋管,收集混勻不能凝血,樣本量不能少于0.2ml。當天檢測,此檢測為全套結(jié)果,不單獨檢測某一項或者幾項。 |