一、概念

TUN EL 技術(shù)， 即脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶( Terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT )介導(dǎo)的dUTP 缺口末端標記(TdT-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL ) 技術(shù)， 是原位檢測細胞凋亡最敏感、快速、特異的新方法， 已廣泛用于生物、醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。

二、原理

對不同組織切片先增加細胞膜通透性，然后讓 rTDT 和生物標記的 dTUTP 進入細胞內(nèi)，在 rTDT 的輔助下 dTUTP 與核斷裂的 DNA 3』-OH 結(jié)合，再用 HRP 標記的鏈霉親和素與 dTUTP 上的 biotin 結(jié)合（每個鏈霉親和素至少可以再結(jié)合 3 個 biotin 分子），最后用 DAB、過氧化氫與 SP 上的辣根過氧化物酶 HRP 發(fā)生氧化、環(huán)化反應(yīng)，形成苯乙肼聚合物而呈現(xiàn)棕褐色，最終通過計數(shù)每張切片上不同視野中 TUNEL 陽性細胞的比例來判斷細胞凋亡發(fā)生情況。

三、實驗流程

石蠟切片脫蠟至水→抗原修復(fù)→畫圈自發(fā)熒光淬滅→血清封閉→孵育一抗→孵育二抗→DAPI復(fù)染細胞核→抗熒光淬滅封片劑封片→鏡檢→避光4度保存

四、注意事項

1、采用石蠟切片制片，取材后應(yīng)立即放入固定液中，4度運輸，避免凍存

2、采用冰凍切片制片應(yīng)取新鮮組織，-80℃保存，干冰運輸