一、概念

免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence technique ）又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。目前我們可以對石蠟切片、冰凍切片、細(xì)胞爬片、組織芯片進(jìn)行免疫熒光檢測。

二、原理

免疫學(xué)的基本反應(yīng)是抗原-抗體反應(yīng)。由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性，所以當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上，與其相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。

三、實驗流程

（1）石蠟切片脫蠟至水，或者制作的冰凍切片用冷丙酮在4℃固定10－20分鐘；

（2）抗原修復(fù)，冰凍切片無需修復(fù)；

（3）用0.01M PBST漂洗3次，每次5 min；

（4）滴加正常的血清室溫封閉30 min；

（5）加未標(biāo)記的特異性抗體，4℃過夜；

（6）用0.01M PBST漂洗3次，每次5 min（震蕩漂洗）；

（7）加熒光標(biāo)記的二抗抗體，37℃濕盒避光作用30 min；

（8） 0.01M PBST避光漂洗3次，每次5 min；

（9）甘油緩沖液封片；

（10）熒光顯微鏡觀察。

四、實驗結(jié)果

五、注意事項

1.熒光有衰減，寄回或者重拍都可能有熒光消失的現(xiàn)象，建議客戶在下單時增加拍照張數(shù)。

2.做石蠟包埋樣本保存及運輸：常溫置于4%多聚甲醛固定液內(nèi)保存及運輸（需注意固定液的量最好是組織的10倍以上，樣本需完全浸泡于固定液內(nèi)并防止樣本貼壁固定不良，大標(biāo)本最好使用大的標(biāo)本瓶/袋運輸，建議在大標(biāo)本上按取材包埋要求做多條平行切口，以防標(biāo)本中心固定不透徹。運輸過程中防止固定液滲漏）。

3.做冰凍切片樣本保存及運輸：-80℃或液氮長期保存，干冰運輸。