視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷（retinal ischemia reperfusion injury，RIRI）是臨床上常見的眼病，主要發(fā)生于視網(wǎng)膜中央動靜脈栓塞、急性閉角性青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病等視網(wǎng)膜血管阻塞所引起的缺血性眼病。表現(xiàn)為許多缺血性眼病患者在血液再通后，視網(wǎng)膜損傷嚴(yán)重，視功能進一步下降。視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的病理生理機制十分復(fù)雜，至今尚未完全闡明。

動物模型是研究視網(wǎng)膜缺血的重要途徑之一。目前最常見的模型有兩種：血管結(jié)扎模型和升高眼內(nèi)壓模型。其中升高眼內(nèi)壓模型更接近臨床病理過程，大致步驟由前房刺入連有灌注瓶的灌注針頭，通過升高灌注瓶高度，使眼內(nèi)壓超過體循環(huán)收縮壓或達(dá)到一定的數(shù)值，造成整個視網(wǎng)膜的缺血，拔出針頭后即可恢復(fù)視網(wǎng)膜供血。該方法具有操作簡單、眼內(nèi)組織損傷小、穩(wěn)定、可靠、重復(fù)性好等優(yōu)點。

RIRI動物模型的建立：

實驗動物：健康SD大鼠，6～8周齡，雄性，體重180～250g；

實驗器材：自制升壓裝置（生理鹽水輸液瓶相對大鼠高度150cm）、 彎鑷1把、自制注射器25G針頭、5ml注射器、酒精棉球、棉簽等；

藥品試劑：20%烏拉坦、氯霉素滴眼液、紅霉素眼膏、托吡卡胺滴眼液等；

因手術(shù)時間長，故使用麻醉程度更深、麻醉時間更長的烏拉坦進行麻醉。采用20%烏拉坦按0.6ml/100g的劑量腹腔注射麻醉動物。將大鼠側(cè)躺在手術(shù)桌上，右眼朝上，用酒精棉球?qū)ρ劭糁車M行消毒處理。用鑷子將大鼠眼球適當(dāng)擠出，滴入1滴氯霉素滴眼液以消毒和清潔結(jié)膜囊。

滴入1滴托吡卡胺滴眼液，約2～3min左右，等待大鼠眼瞳充分?jǐn)U散。打開輸液瓶開關(guān)，流速調(diào)節(jié)到最小，右眼前房插入連通輸液瓶的自制注射器25G針頭，插針過程中，動作緩慢輕柔，注意不要將眼球插穿。

針頭插好后，緩慢移走鑷子，醫(yī)用膠帶固定輸液管防止針頭滑落。逐漸將輸液流速調(diào)節(jié)到最大，此時老鼠的眼內(nèi)壓約120mmHg，即可觀察到大鼠眼球變蒼白。持續(xù)90min，期間定時觀察大鼠情況，如有蘇醒跡象，及時補充麻醉劑。之后拔出針頭，可見眼球顏色逐漸恢復(fù)正常，球結(jié)膜充血，視網(wǎng)膜恢復(fù)血供，形成了再灌注。術(shù)后滴入氯霉素滴眼液和涂抹紅霉素眼膏預(yù)防感染。

RIRI動物模型的驗證：

眼球觀察

在手術(shù)過程中，插入針頭后，肉眼可見大鼠球結(jié)膜和虹膜顏色變蒼白，拔出針頭后，球結(jié)膜和虹膜顏色逐漸恢復(fù)。

HE染色

分別于6h、24h、48h、72h、7d時間點處死大鼠。用剪刀將大鼠眼周圍軟組織分離，用眼科剪從角膜鞏膜緣游離球結(jié)膜，分離球后組織，將視神經(jīng)切斷連同眼球一起取出，將眼球周圍組織游離干凈，迅速從角膜鞏膜交界處剪開眼球去掉房水和晶狀體，立即放入固定液中固定24h。對標(biāo)本切片進行HE染色，高倍鏡下觀察視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)。

正常大鼠的視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)緊密，RGCs（視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞）排列整齊；術(shù)后大鼠的視網(wǎng)膜細(xì)胞外節(jié)腫脹、疏松，內(nèi)外核層細(xì)胞部分丟失，內(nèi)外網(wǎng)狀層紊亂，RGCs數(shù)目少于正常大鼠。