一、原理

DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細胞膜，進入細胞后，被水解生成DCFH。而DCFH不能透過細胞膜。細胞內(nèi)的ROS可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。DCF被488nm激發(fā)光激發(fā)后，發(fā)射530nm的熒光信號，被FITC通道接收，檢測DCF的熒光就可以判定細胞內(nèi)活性氧ROS的水平。

二、實驗流程

收集細胞→PBS清洗→JC-1工作液孵育→熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀分析

三、注意事項

樣品為帶培養(yǎng)基的活細胞，常溫運輸

四、應(yīng)用

1、ROS可對細胞膜結(jié)構(gòu)、核酸和蛋白分子產(chǎn)生氧化作用，引起其結(jié)構(gòu)和功能障礙。

2、ROS增多會導(dǎo)致機體產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)(Oxidative Stress)造成細胞損傷

3、ROS參與多種病理機制，百種以上的疾病狀態(tài)都可能有ROS的參與。

4、檢測細胞ROS的含量，可以了解ROS在細胞一些生理和病理狀態(tài)中的變化，分析藥物效應(yīng)和相關(guān)機制